嘌呤霉素（puromycin）抗体检测卵白合成和翻译防止的旨趣和要领

嘌呤霉素防止卵白合成的旨趣：

嘌呤霉素（puromycin）和氨酰-tRNA分子3'终端的结构访佛，豪放与核糖体的A位点齐集，从而被添加到新合成的肽链中去。puromycin和核糖体的A位点齐集然后掺入蔓延的肽链之后，则无法不绝参与随后的肽链蔓延反映，导致卵白质合成的提前远隔，然后开释出C-终端含有嘌呤霉素的不熟习的多肽（如下图红色部分所示）。因此，向细胞中添加puromycin会防止细胞内通盘的卵白质合成。

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嘌呤霉素防止卵白合成旨趣（图片开头于www.cellco.com）

含有puromycin的不熟习的多肽不错被针对puromycin的抗体识别，因此不错通过WB或者IFA检测细胞内总的卵白质合成情况，或者翻译防止情况。

puromycin抗体检测卵白翻译防止案例详解：

（1）puromycin抗体WB法

如下图所示，作家用鼠诺如病毒（murine norovirus，MNV）感染骨髓开头的巨噬细胞，差异于感染后的3h、6h、9h、12h和15h收样，每次收样前用10 ug/ml的puromycin措置20min，主义是让puromycin掺入到新和成的多肽中去，然后就能用puromycin的抗体检测新和成的多肽了。恶果浮现，跟着感染手艺延长，puromycin抗体豪放检测到的卵白含量迟缓镌汰，讲解新和成的卵白减少了，也等于解说MNV感染防止了卵白翻译。

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鼠诺如病毒感染防止宿主卵白翻译（Svenja Fritzlar et al. 2019. mBio）

（2）puromycin抗体IFA法

puromycin的抗体除了不错作念WB，也不错通过作念IFA来检测细胞卵白翻译防止。作家雷同是用MNV感染，差异于感染后的6h、9h和12h固定细胞，固定前用10 ug/ml的puromycin措置30min。

如下图所示，anti-puromycin检测的是新和成的多肽，anti-VPg标记被MNV感染的阳性细胞。尤其是MNV感染12hpi时，MNV阳性的细胞（红色）中puromycin的信号镌汰，讲解MNV感染的细胞中卵白翻译被防止。

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鼠诺如病毒感染防止宿主卵白翻译（Svenja Fritzlar et al. 2019. mBio）

puromycin抗体筛选卵白翻译防止因子：

为了筛选MNV编码的卵白翻译防止因子，作家将MNV编码的基因转染到HEK-293T细胞中，用10 ug/ml的puromycin措置20min，收样WB用puromycin抗体检测卵白翻译情况，恶果浮现NS3豪放防止宿主卵白翻译。

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雷同的，将MNV编码的基因转染到Vero细胞中，用10 ug/ml的puromycin措置30min，然后用puromycin抗体染色检测卵白翻译情况，恶果浮现NS3豪放防止宿主卵白翻译，因为NS3阳性细胞（红色）中puromycin信号（绿色）是镌汰的。

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